Изучение прибора «vita» в экспериментах in vitro и in vivo

ISSN 0016-9919. Медицина труда и промышленная экология, № 9, 2002

УДК 613.647:616-001.21

P.Я.  Подчерняева, Т.М. Хижнякова,  Г.Р.  Михайлова,  Е.И.  Исаева,  М.В. Мезенцева

ИЗУЧЕНИЕ ПРИБОРА «VITA» В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO И IN VIVO

 

ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, НИИ эпидемиологии и микробиологии

им. Н.Ф. Гамалеи, Москва

 

Множество экспериментов in vitro и in vivo с использованием современных методик подтвердило безвред­ность и эффективность защитного устройства "VITA" от негативного воздействия электромагнитных полей (ЭМП) для клеток человека и живого организма, что позволяет сделать вывод о целесообразности использования устройства биоэнергетической безопасности "VITA".

Ключевые слова: клетки легкого эмбриона человека, клетки мозга человека, иммунный статус, элек­тромагнитные поля, устройство "VITA".

В настоящее время внимание ученых всего мира привлечено  к проблеме защиты человека от биопатогенных полей, возникающих при работе электронной техники.  Международная  научная программа ВОЗ по биологическому действию ЭМП начиная с 1996 г. посвящена анализу полученных результатов относитель­но отрицательного воздействия этих полей на организм человека. Указом Президента РФ № 1300 (от 17.12.97) утверждена Концеп­ция Национальной безопасности Российской Федерации, которая определяет здоровье населения основой национальной безопасности страны. Распоряжением Правительства РФ от 31 августа 2000 г. за № 1202-р была принята Концепция охраны здоровья населения РФ на период до 2005 г. [1]. Одной-из задач этой концепции является использование результатов научных исследований при разработке и реализации программ с учетом необходимости устранения основных факторов риска, оказывающих негативное влияние на здоровье населения. Необходимым является обеспечение безопасности условий труда в связи с возросшим уровнем профессиональной заболеваемости. Учитывая вредное влияние излучений телевизоров, компьютеров и мобильных телефонов, задачей наших исследований являлось изучение в экспериментах in vitro и in vivo прибора "VITA", рекомендованного в качестве устройства биоэнергетической безопасности [4].

Материалы и методики. В опытах in vitro использовали диплоидные фибробластоподобные клетки легкого эмбриона человека (ЛЭЧ) и гетероплоидные клетки глиобластомы человека (GL-6).

Для выращивания культур применяли питательные среды: 199 среда, Игла MEM и Игла в модификации Дульбекко с добавлением 10—15 % эмбриональной сыворотки плодов коровы (ЭТС, фирмы Gibco) и гентамицин. Индекс пролиферации (ИП) определяли по отношению числа выросших клеток к числу посеянных.

Жизнеспособность клеток (в %) определяли при окрашивании их 0,4 % раствором три-

панового синего и подсчете живых клеток в камере Горяева.

Морфологическая картина изучалась двумя методами: с помощью окраски клеток азурэозином по Романовскому и ДНК-специфичным флюорохромом оливомицином с последующим исследованием препаратов в люминесцентном микроскопе.

Эксперименты in vivo проводили на белых мышах самцах весом 14 г (в каждой группе по 14 мышей), кровь у мышей забирали спустя  7   дней  после   воздействия   и   изучали   у   них иммунный статус  по методу [2].  Мышей инфицировали   интраназально   вирусом   гриппа Н3№2 (штамм A/Auru 1/68), вирулентный для мышей в     разведении 10 (титр вируса Ig 4,0 LD50). ИФН-статус определяли согласно методу [3].    Использовали прибор "VITA", выполненный в форме пластины размером 5 х 8 см или доски размером 15 X 25 см, генератор ВЕ-МЕТР-АТ-002, компьютер Bull Micral (286).

Результаты. Эксперименты in vitro проводились в двух сериях опытов: в 1-й серии изучали влияние излучения компьютера Bull Micral (286) на ростовую активность клеток ЛЭЧ. В этой серии прибор "VITA" применялся в виде пластины и доски. Во 2-й серии исследовали влияние излучения мобильного телефона на активность роста мозговой линии клеток (глиобластомы человека GL-6).

В  этих опытах  прибор   "VITA"   применялся только в виде пластины.

Напряженность электрического поля и плотность магнитного потока у персонального компьютера Bull Micral (286) представлена в табл. 1. Исследование проведено в Институте медицины труда РАМН.

Серия экспериментов с клетками АЭЧ проводилась в двух вариантах: с суспензией клеток в питательной среде Игла MEM и с монослоем клеток без питательной среды.

Таблица 1.

Влияние излучения компьютера на клетки ЛЭЧ и исследование эффективности защитного устройства "VITA"

 

ИП

              Впереди

компьютера

               Позади

компьютера

Варианты опыта

Монослой, %

Без защиты ИП Монослой, %

С защитой ИП Монослой, %

Без защиты ИП Монослой, %

С защитой ИП Монослой, %

Контроль

2,0     100

 

 

 

 

Опыт (после 3 ч воздействия)

 

1,7     80

2,4     100

1,5     60

2,3     100

 

В 1-м варианте использовали взвесь клеток ЛЭЧ в концентрации 100 тыс. кл/мл, которую помещали впереди или сзади компь­ютера на расстоянии 5 см на 3 ч. Как видно из табл. 2, трехчасовое воздействие излуче­ния компьютера на клетки ЛЭЧ приводило к снижению ростовой активности до индекса пролиферации ИП 1,7 и 1,5 по сравнению с контролем (ИП=2,0) и падению концентра­ции взвеси клеток до 60 тыс. кл/мл (по срав­нению с 100 тыс. кл/мл в контроле). С при­менением защитного устройства "VITA" (в виде пластины) не наблюдалось снижения роста клеток (ИП = 20). Морфология клеток не изменялась, монослой оставался таким же, как в контроле.

Таким образом, воздействие в течение 3 ч ЭМП компьютера на клетки ЛЭЧ приводит к торможению роста и размножению клеток. При использовании защитного устройства "VITA" полностью сохраняется ростовая активность, жизнеспособность и морфология клеток.

2-й вариант опыта проводился с монослоем клеток ЛЭЧ без питательной среды, по­мещенных впереди компьютера на расстоянии

5 см. Воздействие компьютера было однократное в течение 1 ч, прибор "VITA" в виде пластины помещали сзади клеток на расстоянии 5 см.

Спустя 1 ч после воздействия монослой клеток заливался питательной средой и культивировался при 37 °С в течение 24 ч. Пос­ле этого клетки с каждого матраса пересевали на 3 других матраса для определения ИП и жизнеспособности и на пенициллиновые флаконы со стеклами для изучения морфологии клеток и ДНК ядер, которые инкубиро­вали при температуре 37 °С в течение 4 сут.

Результаты опыта представлены на рисун­ке и в табл. 3. Из представленных в таблице данных видно, что облучение компьютером клеток ЛЭЧ в течение 1 ч при комнатной температуре после однократной обработки монослоя клеток не значительно влияет на ростовую активность клеток ЛЭЧ (ИП=1,2) при контрольных значениях ИП^Н.б. Одна­ко пересев клеток, облученных компьютером, приводит к полному торможению их роста (ИП=0) с последующей дегенерацией клеток. В то же время применение устройства "VITA" в тех же экспериментальных усло-

 

Таблица 2

Напряженность электрического поля и плотность магнитного потока у персонального компьютера Bull Micral (286)

Измерение  проводилось прибором   ВЕ-МЕТР-АТ-002   (свидетельство  о   поверке  №  3751/2000  действительно но 31 декабря 2001 г.)

Напряженность  электрического поля В/м

Перед   

компыотером

С задней стороны

 компьютера

Гигиенические нормативы

 

На расст

 см

На расст

 см

 

 

5

50

5

50

 

В диапазоне 5 Гц — 2 кГц

210

189

126

186

25

В диапазоне 2 — 400 кГц

15,9

2,4

2,6

2,5

2,5

Плотность магнитного потока, нТл

 

 

 

 

 

В диапазоне 5 Гц — 2 кГц

2700

160

4600

270

250

В диапазоне 2 — 400 кГц

557

34

347

24

25

Заключение:  на расстоянии 5  см от компьютера уровни  ЭМИ   в  10  раз  и  более  превышают допустимые значения по СанПиН 2.2.2./542—96; на расстоянии 50 см установлено незначительное превышение ПДУ.

 

Таблица  3

 Индекс пролиферации (ИП) клеток ЛЭЧ

Варианты

Контроль

Компьютер

Компьютер + "VITA"

 

ИП     Ср. ИП

ИП     СР. ИП

ИП     Ср. ИП

Однократная обработка монослоя клеток

1,6

1,2

1,5

После рассева клеток

1,8

1,9         1,8

 1,6

0

0             0

0

1,7

1,8          1,8

2,0

Схема опыта и результаты исследования

Морфология клеток через 2    Морфология аналогична кон-     Морфология аналогична кон-

сут.   Наблюдается   полный   мо-      тролю.   Монослой   неполный.     тролю. Полный монослой,

нослой, однако морфология ядер      Местами  беспорядочный   рост

и клеток несколько изменена.   клеток и разнородность ядер. 
Делений мало.

            ИП = 16                                  ИП = 12                                   ИП = 15

Морфология                                              Морфология                                  Морфология
Полный, но местами нерав-         Наблюдаются  одиночные           Монослой  клеток с разре-
номерный монослой.Морфоло-     клетки, укороченные,  изменен-   женными участками. Морфоло­
гия ядер и  клеток несколько      ной формы. Отмечается дегене-    гия   не  измененная. Активное
изменена.                                              рация клеток с морфологически               деление клеток.

                                          ми   изменениями   цитоплазмы

                                          (грубо зернистая) и клеток (ok-

                                           ругление и отделение от стекла). 

виях оказывает положительное действие, способствуя сохранению жизнедеятельности    клеток ЛЭЧ и их дальнейшему развитию.

В варианте опыта с использованием в качестве защитного устройства доски при общем торможении роста культуры при пассировании клеток прослеживается тенденция к увеличению ИП и степени образования монослоя в случае использования защиты. Так, во 2-й серии без защиты ИП составлял 1,3 при 50 % монослоя, с защитой — ИП=1,8 при 90 % монослоя, что приближается к уровню контроля — 2,0 при 100 % монослоя.

Морфологические исследования показали, что в варианте с защитными приборами скорость образования монослоя и морфология клеток и ядер практически не отличались от

контрольных. В то же время облучение клеток ЛЭЧ компьютером вызывало образование большего количества эозинофильных цитоплазматических включений, повидимому, связанных с деструкцией цитоплазмы клеток, приводящей к дегенерации клеток по мере пассирования.

Задачей 2-й серии исследования in vitro являлось изучение влияния излучения генератора (равнозначного по мощности излучению мобильного телефона) на клетки мозга человека (GL-6). Мы предположили, что мозговые клетки при применении человеком мобильного телефона могут повреждаться в первую очередь, аналогично тому, как клетки легкого повреждаются при воздействии компьютера.                              

Эксперименты проводились в двух вариантах:

 

       В 1-м варианте монослой клеток без питательной среды подвергали воздействию 450 МГц, излучаемых генератором в течение 1 ч (15 мин облучение, 5 мин перерыв и т. д.), во 2-м варианте монослой клеток в присутствии питательной среды подвергали аналогичному воздействию также в течение 1 ч.

В 1-м варианте клетки находились без питательной среды в течение 5 ч (время транспортировки для облучения генератором ) при комнатной температуре. Только спустя 5 ч продолжено культивирование клеток с питательной средой ДМЕМ+10 % ЭТС при 37 °С. Установлено, что клетки мозга очень чувствительны к таким условиям культивирования, что привело к резкому снижению их ростовой активности. Наблюдалось повреждение клеток: они были не жизнеспособны и не способны к дальнейшему пассированию. Во 2-м варианте опытов клетки находились в питательной среде 4 ч при комнатной температуре (время транспортировки). Выявлено, что нахождение клеток даже в среде в течение этого времени приостанавливает их рост и вызывает изменение их морфологии, но менее значительное, чем в 1-м варианте. Результаты эксперимента приведены в табл. 4. Из таблицы видно, что облучение клеток GL-6 в дозе 450 МГц приводит к гибели более чем 64 % клеток, вместо 1800 X 1000 кл/мл их выросло в 3 раза меньше, то есть 650 х 1000 кл/мл. Применение прибора "VITA" приводило к усилению роста клеток до 1300 х 1000 кл/мл.

     Таким образом, на основании этих экспериментов можно заключить, что для мозговых клеток необходимо соблюдение оптимальных условий культивирования, нарушение которых приводит к торможению их ростовой активности. Использование прибора "VITA" в эк-

спериментах in vitro способствовало увеличению ростовой активности клеток GL-6, защищая их от воздействия мобильного телефона.

    Учитывая положительные в целом результаты изучения защитного устройства "VITA" в экспериментах in vitro нам представлялось целесообразным посмотреть эффективность этого прибора в опытах in vivo на модели белых мышей. Нами проведено исследование влияния "VITA" на иммунный статус здоровых и зараженных гриппом мышей в обычных условиях и при воздействии компьютера. Результаты этих экспериментов представлены в табл. 5, из которой видно, что облучение компьютером оказывает отрицательное влияние на иммунную систему животных, особенно инфицированных вирулентным для них вирусом гриппа H3N2. При этом наблюдалось снижение количества Т-лимфоцитов, включая Т-хелперы и уменьшение фагоцитарной активности клеток, что свидетельствует о подавлении защитных сил организма и повышении восприимчивости к гриппозной инфекции. Известно, что заболевание гриппом вызывает подавление иммунной и интерфероновой систем живого организма. Влияние изучения компьютера при экспериментальной гриппозной инфекции приводило к еще более значительному угнетению иммунитета у мышей по сравнению только с воздействием вируса.

    Учитывая, что система интерферонов (ИФН) является одной из важных характеристик защитных свойств организма и его готовности противостоять неблагоприятным воздействиям, нами проведено изучение ИФН-статуса у здоровых и зараженных гриппом мышей в обычных условиях, а также при воздействии на животных излучений компьютера. В табл. 6 представлены данные об изменении показателей ИФН-статуса у здоровых

 

Таблица  4          Схема опыта и результаты исследования

Клетки глиобластомы человека GL-6

 

Конечный результат после пересевов

                       Контроль                               

   Излучение генераторав  диапазоне                  мобильного телефона 40 МГц

450 МГц + "VITA"

1800 х 10³кл/мл                   

100 %

650 х  10³кл/мл                                            

 36 %

1300 х 10 ³ кл/мл

72 %

                                                                        

 Таблица  5

Исследование влияния   "VITA" на иммунный статус   зараженных гриппом мышей в обычных условиях и при воздействии компьютера

                                                         Воздействие на биообъект

Показатель

Контроль

Компьютер

Компьютер + вирус гриппа

 

(без воздействия)

+ вирус гриппа

+ "VITA"

Лейкоциты, 10/л

3,0 ± 0,1

7,8 ± 0,2

4,7 ± 0,4

Нейтрофилы палочкоядерные, %

2 ± 0

3 ± 0,5

1 ± 0

сегментоядерные

59 ± 0,5

53,0 ± 1,0

62,0 ± 1,0

Моноциты

3

8 ± 1,0

4,0 ± 0,3

Эозинофилы

4 ± 0,5

7 ± 1,0

3,0 ± 0,2

Т-лимфоциты, %

11 ±2

47 ± 0,9

60 ± 1,0

Нулевые клетки

14 ± 0,6

45 ± 1,7

32 ± 1,0

Т-хелперы

64,0 ± 0,5

37,0 ± 1,0

50,0 ± 2,0

Фагоцитирующие нейтрофилы, %

44,0 ± 0,5

30,0 ± 1,0

43,0 ± 1,0

Индекс нагрузки

2,0

2,6

2,1

 

Таблица    6

Исследование влияния "VITA"  на интерфероновый статус здоровых и зараженных гриппом мышей в обычных условиях и при воздействии компьютера

     Параметр

                                                Воздействие на биообъект

ИФН -статуса

Контроль (без

"VITA"

Грипп

Грипп + "VITA"

К+ Г

К + V

К + Г + V*

 

воздействия)

 

 

 

 

 

 

Сыворот. ИФН

< 2**

< 2

16

8

< 2

< 2

< 2

Споит. ИФН

< 2

< 2

2

< 2

8

< 2

< 2

ИФН- α

320

640

40

80

20

160

80

ИФН- γ

128

128

16

32

4

64

64

Чувствительность к ИФН и индукторам ИФН

ИФН- α

(+)

(+)

(+)

(+)

(-)

(+)

(+)

Ридостин

64

32

16

32

16

8

8

Неовир

32

32

8

64

4

32

4

Циклоферон

32

64

8

64

4

32

8

* К — компьютер,  Г — грипп,  V -  "VITA". **В таблице представлены титры ИФН  (Ед/мл).

Нормы показателей ИШН статуса мышей: сывороточный ИФН < 8 Ед/мл, спонтанный ИФН <2 Ед/мл, ИФН-α -160-1280 Ед/мл, ИФН-γ- 64-512 Ед/мл; чувствительность к ИФН — ( + ), чувствительность к  препаратам — 8-128 Ед/мл.

 

и больных мышей под воздействием компьютера и "VITA". При экспериментальной гриппозной инфекции у животных обнаруживалось повышение сывороточного и спонтанно вырабатываемого ИФН, что указывает на остроту и тяжесть заболевания. Воздействие компьютера при гриппе повышало спонтанно продуцируемый ИФН.

Применение прибора "VITA" при гриппе и при воздействии компьютера способствовало снижению как сывороточного, так и спонтанного ИФН. Показано,

что при экспериментальной гриппозной инфекции снижалась способность к продукции ИФН-α и ИФН-γ, что является показате­лем нарушения функциональной активности В-и Т-лимфоцитов. Воздействие компьютера при гриппе вызывало у мышей еще большее снижение функциональной активности клеток иммунной системы. Отмечено, что "VITA" способствовал восстановлению способности к продукции ИФН- α  и ИФН- γ  у мышей при гриппе и облучении компьютером.

Анализ иммунного статуса зараженных гриппом мышей при воздействии компьютером и применении прибора "VITA" показал, что этот прибор защищал организм мышей от влияния излучения, снимая симптомы нарушения функций иммунной системы, то есть нейтрализовал негативное воздействие компьютера на иммунитет.

Таким образом, устройство биоэнергетической безопасности "VITA" при совместном воздействии электромагнитных излучений компьютера и гриппозной инфекции обладает защитным эффектом в опытах in vivo.

Учитывая важность изучаемой темы, кото­рая на сегодняшний день возведена в ранг национальной проблемы, исследования в этом направлении требуют дальнейшего изучения специалистами, работающими в различных областях.

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.  Ж.  "Национальная безопасность и  геополитика России".  — 2001. —  № 2 (3).

2.  Иммунология / Под ред. У. Пола. — М.: Мир, 1989. — Т. 3.

3.   Кассирский И.А., Алексеева  Г.А.   //   В   кн.: Клиническая гематология. — М.: Медицина, 1970. — С. 765.

4.  Патент РФ № 48177, 2000 г.

Поступила 27.06.02

 

SUMMARY: Many in vitro and in vivo expe­riments using contemporary methods supported safety and efficiency of "VITA" device protecting humans and li­ving beings from electromagnetic fields. Therefore, bioe-nergetic safety device "VITA" is advisable for use.